动物性食品中大环内酯类多残留检测技术

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动物性食品中大环内酯类多残留检测技术

法律快车官方整理更新时间： 2020-04-10 03:37:26 人浏览

导读：

饲料中长期量使用抗菌药物，或其添加量超过亚剂量水平，可造成动物性食品中抗菌药物的残留，威胁人类健康因此，动物性食品中的抗菌药物残留引起了各国政府的关注，纷纷采取各措施进行残留控制和检测。以下就动物性食品中（包括：肉、肝脏、肝脏、蛋、奶和蜂

饲料中长期量使用抗菌药物，或其添加量超过亚剂量水平，可造成动物性食品中抗菌药物的残留，威胁人类健康因此，动物性食品中的抗菌药物残留引起了各国政府的关注，纷纷采取各措施进行残留控制和检测。以下就动物性食品中（包括：肉、肝脏、肝脏、蛋、奶和蜂蜜）大环内酯类药物残留检测技术介绍如下：

　　日本Atsugi健康中心Mineo等利用气相色谱同时检测7种青霉素，3种四环素，5种氨基糖苷类抗生素，5种大环内酯类抗生素，2种聚醚类抗生素，氯霉素和13种药物。采用10%的TCA抽提肉中的36拟测定的药物，提取液上Amberlite XAD-2树脂柱和活化的碳树脂柱，随后分别用甲醇和0.01N HCl-甲醇溶液洗脱。洗脱液经过浓缩、干燥后，甲基硅烷化（用吡啶，N,O-双三甲硅基乙酰胺，三甲基硅咪唑和氯化三甲基硅烷），采用气相色谱-火焰离子化检测。该法对所有36种药物的回收率超82%，对大部分药物的检测限与检测单药物的方法相等[1]。

　　法国CNEVA 中心的Delepine等描述了采用PB/LC/MS方法检测牛肌肉中的5种大环内酯类抗生素的方法。采用梯度洗脱的反相液相色谱-MS检测证明在牛肌肉中有螺旋霉素，泰乐霉素，替米考星，红霉素和交沙霉素的残留。采用氯仿提取组织中的大环内酯类抗生素，提取液用而二醇固相提取净化，通过阴离子和阳离子化学离子化，鉴定5种大环内酯类抗生素。该法对每种大环内酯类抗生素检测限50μg/kg[2]。

　　日本Saitama Prefectural公共卫生协会Horie等建立了HPLC同时检测肉中五种大环内酯类药物(交沙霉素，柱晶白霉素，米罗米星，螺旋霉素和泰乐霉素)的方法。用0.3%偏磷酸甲醇（7:3，v/v）提取药物，提取液上Bond Elut SCX (500 mg)cartridge清洗。HPLC分离使用Puresil 5C18 柱(150 x 4.6 mm I.D.)，移动相为0.025 M 磷酸缓冲液-乙腈梯度系统(pH 2.5)，流速1.0 ml/min。交沙霉素，柱晶白霉素，米罗萨霉素和螺旋霉素检测波长232nm，泰乐霉素检测波长287nm。所有药物制作的标准曲线的线性范围为2.5-100ng。在1.0μg/g添加水平，药物的回收率70.8-90.4%，对每个药物的检测限为0.05μg/g[3]。

　　兽医药物残留欧盟参考实验室Juhel-Gaugain等建立了高效液相色谱同时检测猪、牛和家禽的肌肉中替米考星、泰乐霉素、螺旋霉素和他们的主要代谢产物的方法。采用乙腈提取肌肉中残留的大环内酯抗生素，利用异辛烷液液萃取去除脂肪，提取液上Bond Elut C18 cartridges净化。在Inertsil ODS3 C18(150 x 4 mm)柱上进行HPLC分离，移动相为0.05%三氟醋酸-乙腈剃度系统，替米考星-泰乐霉素和螺旋霉素-neospiramycin采用两种剃度模式，检测波长分别为287和232nm。该法对猪肉样品中含有1/2最大残留量(MRL)到4倍MRL时的检测性能进行了验证，对替米考星，泰乐霉素，螺旋霉素和neospiramycin平均回收率分别为60%，63.5%，51%和42%。对替米考星和泰乐霉素检测限15μg/kg，对螺旋霉素检测限30μg/kg，对neospiramycin检测限25μg/kg[4]。

　　巴塞罗那大学Leal等利用液相色谱分离动物性食品中大环内酯类抗生素，采用高纯硅封端的C18柱作为分离柱，移动相为磷酸缓冲(pH 2.5）-乙腈混合物，采用两种紫外检测系统（波长、二极管阵列）检测。该法对螺旋霉素，替米考星，泰乐霉素，kitasamicin和交沙霉素的检测限为6-33μg/L，对红霉素和竹桃霉素的检测限约为400μg/L。通过对添加了大环内酯类抗生素的鸡肌肉的检测证明，该法适合于同时检测五种大环内酯类抗生素残留的检测[5]。

　　比利时CER的Dubois等建立了HPLC-MS-MS法检测各种组织（肌肉，肾脏和肝脏），蛋和牛奶中5种大环内酯内药物（泰乐霉素，替米考星，螺旋霉素，交沙霉素和红霉素）方法。以罗红霉素作为内标。该法采用pH 10.5 Tris 缓冲液作为抽提液，钨酸钠沉淀去除药物提取液中的蛋白，上Oasis固相提取柱清洗。HPLC分离色谱柱为有保护柱的Purospher C18 (125 x 3 mm I.D.)，移动相为0.1 M 醋酸铵-乙腈梯度系统，流速为0.7ml/min。在阳离子模式下，以质子化的分子作为母离子进行电喷雾电离，每项分析，选择四种产物离子进行多级反应监测。采用NRM HPLC-MS-MS分析一个阴性对照和加强样品，进行确证性研究，证明5种大环内酯内药物。所有样品分析都用四种离子证明，可重复的离子率范围2.4-15%。所有的药物在1/2最大残留限制的浓度下可进行定性和定量检测。在欧盟推荐的浓度范围0.5 MRL-2 MRL，该法具有足够特异性，定量性和可重复性(精确性：80-110%，相对标准偏差：2-13%)。该法每天可提取和分析50个样品[6]。[page]

　　日本千叶公共卫生研究院的Nagata等采用乙腈提取牛肌肉中14种β-内酰胺和大环内酯类抗生素，提取液用正己烷液液萃取去除脂肪，高效液相色谱分离使用TSK-gel ODS-80TM柱，乙腈-0.05%TCA梯度洗脱，二极管检测器定量检测。对牛肌肉在0.1 ppm 添加水平回收率63%，定量检测限0.04ppm[7]。

　　西班牙国立远程教育大学Garcia-Mayor等建立了快速、简单和灵敏的液相色谱UV二极管检测同时测定羊奶中7中大环内酯类抗生素（红霉素，竹桃霉素，罗红霉素，交沙霉素，螺旋霉素，泰乐霉素和伊维菌素）残留。抗生素残留的提取过程包括：浓缩的氢氧化钠-乙酸乙酯对无蛋白样品处理，碱水解去脂肪。对每种抗生素的回收率在55%-77%之间，相对标准偏差1%-6.5%。定量检测限：伊维菌素72.4μg/kg，罗红霉素48.3μg/kg，红霉素，竹桃霉素，交沙霉素，螺旋霉素和泰乐霉素为24.1μg/kg。该法成功应用于牛奶中多药物残留（法定最高浓度水平以下）的检测[8]。

　　意大利Benetti等建立了液相色谱-MS/MS同时检测蜂蜜中林肯霉素和5种大环内酯类抗生素残留技术。拟分析物采用0.1 M pH 10.5的Tris缓冲液提取，在OASIS HLB 柱上固相萃取净化，在Synergi Hydro-RP反相柱上对拟分析物进行色谱分离，使用0.01 M 的醋酸胺（pH 3.5）和乙腈进行梯度洗脱，流速0.25 ml/min。根据2002/657/EC，对该方法的线性范围，特异性，CCalpha，CCbeta，重复性，实验室内的再现行，回收率等进行了验证[9]。

　　参考文献：

　　[1] An analytical study of antibacterial residues in meat: the simultaneous determination of 23 antibiotics and 13 drugs using gas chromatography. Vet Hum Toxicol. 1992 Oct;34(5):393-7.

　　[2] Multiresidue method for confirmation of macrolide antibiotics in bovine muscle by liquid chromatography/mass spectrometry. J AOAC Int. 1996 Mar-Apr;79(2):397-404.

　　[3] Simultaneous determination of five macrolide antibiotics in meat by high-performance liquid chromatography. J Chromatogr A. 1998 Jul 3;812(1-2):295-302

　　[4] Multiresidue chromatographic method for the determination of macrolide residues in muscle by high-performance liquid chromatography with UV detection. J AOAC Int. 1999 Sep-Oct;82(5):1046-53.

　　[5] Determination of macrolide antibiotics by liquid chromatography. J Chromatogr A. 2001 Mar 2;910(2):285-90.

　　[6] Identification and quantification of five macrolide antibiotics in several tissues, eggs and milk by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry. J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 2001 Apr 5;753(2):189-202.

　　[7] Simultaneous determination of residual fourteen kinds of beta-lactam and macrolide antibiotics in bovine muscles by high-performance liquid chromatography with a diode array detector. Shokuhin Eiseigaku Zasshi. 2004 Jun;45(3):161-4.

　　[8] Liquid chromatography-UV diode-array detection method for multi-residue determination of macrolide antibiotics in sheep''''''''s milk. J Chromatogr A. 2006 Jul 28;1122(1-2):76-83. Epub 2006 May 8.

　　[9] Simultaneous determination of lincomycin and five macrolide antibiotic residues in honey by liquid chromatography coupled to electrospray ionization mass spectrometry (LC-MS/MS). Food Addit Contam. 2006 Nov;23(11):1099-108. [page]

文章来源:中国食品商务网

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